Требуется инженерная фантазия

[progenes]

Мы тут уже сломали мозги, может у кого есть свежие оригинальные неожиданные сумасшедшие идеи.

Есть примерно такая пробирочка. Маленькая.



В пробирку добавляется сначала одна фаза, на нее наслаивается другая фаза, содержащая радиоактивную пробу, а на самый верх третья фаза, признаюсь - это пластиды. Центрифугируем. Пластиды проходят первую фазу, "глотают" радиоактивную метку и опускаются на дно в виде осадка. Теперь мне надо как-то этот осадок пластид отсосать так, чтобы не отхлебнуть верхнюю фазу.

Пробирки вот такого размера:



Мы тут пробуем колоть иглой снизу и сбоку, но не получается. Может есть еще какие-то хитрые подходы?

UPD: Не зря спросила, вот не зря! Пока навскидку сразу предложили два метода - заморозить и отрезать или вставить в насадку на пипетку иглу и отсосать. Завтра пробуем с краской.
Счет 11:4 в пользу У-хромосомы. уууууу!!!

UPD2: Всем огромное спасибо за советы. Узнала много нового и интересного. Лучше всего подошел метод замораживания - отрезания. freedom_of_sea в благодарности!

Comments

[sergepolar.livejournal.com]

А нельзя в начале отсосать всю верхнюю фазу?

[progenes.livejournal.com]

Можно, но все-равно остается на стенках. Это раствор радиоактивно-меченой глюкозы, ее так просто полностью фиг отосешь. Там потом буквально одна капля на нижней фазе зависает и за ней надо пипеткой "гоняться".

заморозить

[freedom_of_sea.livejournal.com]

и отрезать нужный слой

Re: заморозить

[progenes.livejournal.com]

Это идея!!! В азот и скальпелем. Попробуем!

[aosypov.livejournal.com]

Слей верхнюю фазу нахрен в соседнюю пробирку, соскреби пластиды?!

[melkiythegreat.livejournal.com]

Сверху то пробовали?

[progenes.livejournal.com]

так сверху все-равно надо проходить радиоактивный слой.

[an-embrace.livejournal.com]

А обязательно иголкой отбирать? Просто подумалось, если носик обычной эппендорфовской пипетки заткнуть, скажем, капилляром или какой мелкой стеклянной трубочкой, а как носик пройдет сквозь ненужные фазы и погрузится в нужную, вынуть ту трубочку, "надеть" на носик пипетку и отобрать желаемую жидкость. В этом случае контакт ненужной фазы с носиком пипетки будет только снаружи. Ну и чуть-чуть того, что в силу поверхностного натяжения потянулось за носиком в нужную фазу.

[dr-blastarr.livejournal.com]

Добавлю к этому способу, что в пипетку, опущенную до нужной фазы, можно вставить шприц и высосать всё, что надо. В этом случае контакта с другими фазами вообще не будет.

[rempel.livejournal.com]

Phase lock - такой гель, разделяет фазы с разной плотностью.
Мы с его помощью раньше ДНК выделяли.
У них было 2 или 3 варианта с разной плотностью - может, одна из них для пластид подойдет.
https://www.google.com/webhp?sourceid=chrome-instant&ion=1&ie=UTF-8#sclient=psy-ab&q=phase+lock+centrifuge&oq=phase+lock+centrifuge&gs_l=hp.3...5604.10571.2.10765.8.8.0.0.0.0.107.657.7j1.8.0...0.0.0..1c.1.17.psy-ab.MYDEoF3uBx8&pbx=1&bav=on.2,or.r_cp.r_qf.&bvm=bv.48705608,d.dmg&fp=2801615ddb411326&ion=1&biw=1161&bih=715

[progenes.livejournal.com]

о, не знала о таком. Надо почитать, пролезет ли пластида через него. Спасибо, вообще вещь полезная, не для этого, так для другого.

[zloradskij.livejournal.com]

Предлагаю проколоть иглой дюрочку заранее и заткнуть кусочком проволоки. потом выдернуть.

[progenes.livejournal.com]

Прикинь, а если эта проволочка в процессе центрифугирования вываливается или неплотно затыкается? Сдавать центрифугу в Чернобыль на металлолом?

[gsm-sms.livejournal.com]

заморозить, откусить холодными же кусачками (по типу маникюрных) или триммером (тоже маникюрным)

[progenes.livejournal.com]

Прекрасная идея, попробуем завтра пилотный эксперимент с краской.

[geterogen.livejournal.com]

нужно между осадком и жидкостью образовать пузырёк воздуха, через который осадок и высасывать

[progenes.livejournal.com]

технически нереально. Пузрь побольше всплывет, махонького еще надо поймать и проткнуть. А проб у нас штук сорок, если не больше.

[penetrat0r.livejournal.com]

Булькнуть пузырьком воздуха в средней фазе, проходя сверху? Или недостаточно гарантирована степень очистки пробы от верхней в этом случае?

[progenes.livejournal.com]

пробовали. На носик снаружи цепляется капля верхней фазы, которая при переносе носика в новую пробирку спокойно себе стекает.

[bison-bonasus.livejournal.com]

Заморозить и разобрать мини-керн уже предлагали?

[progenes.livejournal.com]

да, хорошая идея. Попробуем покупать в азоте.

[hoegni.livejournal.com]

Я бы попробовал присоединить тонкий полиэтиленовый капилляр к вакуумному насосу и высосал им всю радиоактивную фазу. По.моему, должно получиться.Хотя заморозить и отрезать - тоже наверно неплохая мысль.

[unclegluk.livejournal.com]

Шприц. Для таких пробирок точно должен подойти.

[mamuka-miriuta.livejournal.com]

Русланка, незнаю радили-чи ні - але спробуй в тіп для піпетки 0.1-2 запхати голочку 21, а краще 23-25 gauge. дальше - по протоколу.

[progenes.livejournal.com]

Вище запропонували, тоже кльова мисль!

[kondybas.livejournal.com]

Всі фази - розчини води?

[progenes.livejournal.com]

Ну як тобі сказати. Там суспензія перколу. http://en.wikipedia.org/wiki/Percoll

[serpio.livejournal.com]

Добавить сначала иглу, чтобы она заранее там была?

[progenes.livejournal.com]

Те иглы, что у нас, слишком длинные

[lichinka-vracha.livejournal.com]

Расскажите, пожалуйста, как оно с азотом получилось :)

[baron6011.livejournal.com]

Отсосать верхнюю фазу иголкой. осадок промыть нерадиоактивным буфером. Или его нельзя промывать?

[alex besogonov (from livejournal.com)]

Добавьте магнитные бусинки (beads) и магнитом, магнитом.

[baron6011.livejournal.com]

Как вариант обработать пипеточные типы репел-силаном - тогда на них вообще никакая жидкость залипать не будет и спокойно отсасывать осадок.

[progenes.livejournal.com]

(записывает) репел-силан.

[illarionovanata.livejournal.com]

верхняя фаза жидкая, а нижний плотный осадок?
Я бы вытянула верхнюю фракцию полоской фильтровалки.

[progenes.livejournal.com]

Нет, верхняя фаза жидкая, нижняя фаза жидкая, а внизу плотный осадок. Он-то мне и надо. Можно попробовать аккуратно фильтровалкой.

[till-j.livejournal.com]

А нагреть иглу и проколоть горячей?(пробирки пластиковые судя по всему) Или это уничтожит объект?

[ins0mnis.livejournal.com]

Если иглу накалить может сподручнее будет проколоть сбоку? Или горелый пластик в пробе не есть гут?

[grihanm.livejournal.com]

Можно верхнюю фазу впитать бумажкой/губкой мелкой, если пипеткой высосать плохо получается.

[the-toad.livejournal.com]

А через иглу шприца оно не не проходит? Когда мне нужно отсосать (в хорошем смысле этого слова), я обычно тупо шприц беру, с тупой иглой. Я специально у нескольких игол этот косой срез срезал, получился плоский цилиндрический конец. Такой конец довольно точно попадает, куда надо, и не возмущает остальное.

[stanpolozov.livejournal.com]

> в хорошем смысле этого слова
А когда в плохом? ;-)
Я бы и не подумал, если бы не было поправки.
А почему другой смысл - вдруг стал резко плохим? )))