Требуется инженерная фантазия

[progenes]

Мы тут уже сломали мозги, может у кого есть свежие оригинальные неожиданные сумасшедшие идеи.

Есть примерно такая пробирочка. Маленькая.



В пробирку добавляется сначала одна фаза, на нее наслаивается другая фаза, содержащая радиоактивную пробу, а на самый верх третья фаза, признаюсь - это пластиды. Центрифугируем. Пластиды проходят первую фазу, "глотают" радиоактивную метку и опускаются на дно в виде осадка. Теперь мне надо как-то этот осадок пластид отсосать так, чтобы не отхлебнуть верхнюю фазу.

Пробирки вот такого размера:



Мы тут пробуем колоть иглой снизу и сбоку, но не получается. Может есть еще какие-то хитрые подходы?

UPD: Не зря спросила, вот не зря! Пока навскидку сразу предложили два метода - заморозить и отрезать или вставить в насадку на пипетку иглу и отсосать. Завтра пробуем с краской.
Счет 11:4 в пользу У-хромосомы. уууууу!!!

UPD2: Всем огромное спасибо за советы. Узнала много нового и интересного. Лучше всего подошел метод замораживания - отрезания. freedom_of_sea в благодарности!

Comments

[stanpolozov.livejournal.com]

Во! Придумал!
Обрезаем носик (снизу), чтобы закрылась пробирка.
Вставляем носик и ПОТОМ добавляем метку.
Потом наслаиваем все что надо,
Закрываем пробирку с носиком
Центрифугируем
Этим же носиком болтаем осадок
отсасываем шприцом через носик.
ПРОФИТ

[sssshhssss.livejournal.com]

когда еще ничего не залито, вставляете иглу в нижнюю часть, потом со вставленной иглой заливаете, крутите, потом к игле шприц и откачиваете. зафиксировать иглу клеем.

[dr-pashka.livejournal.com]

Набираем в шприц воздух. Проводим его через радиоактивную фазу в среднюю. Выпускаем воздух (выдуваем остатки радиоактивной фазы). При желании средней фазой можно промыть носик (набрать-выпустить чуть-чуть 2-3 раза). После этого опускаем иглу до дна и отбираем осадок.
Шприц, естественно, что-то типа хроматографического, как тут советовали, со спиленой иглой.

Вариант два - отсосать верхнюю фазу, остатки высосать через кусочек фильтровальной бумаги, прижатой к краю пробирки. После этого работать со средней фазой и осадком. Но, это, конечно, требует навыков.

Вариант три: вместо крышечек поставить септы, воткнуть иглу до дна, потом вставить вторую иглу для сброса давления. После этого прокалываем септу, вносим фазу 1, фазу 2, фазу 3. Вынимаем вторую иглу. После центрифугирования максимум, что будет в иголке - нерадиоактивная фаза 1. Это совсем морочно.

[wasserstrahl.livejournal.com]

О какой тут у вас серьезный консилиум! Круто же!

[denis-despair.livejournal.com]

если надо из двух фаз (жидких) взять образец нижней, то использую длинный запаянный капилляр. Всунул открытым концом до нужного уровня - ничего не заливается, он запаянный (можно руками подогревать, чтобы оттуда воздух еше и выходил), отломал верхний запаянный кончик - туда нужная фаза залилась. Но это в количестве десятков микролитров, на ТСХ
в данном случае попробовал бы долезть заткнутой пастеровской пипеткой, после чего открыть ее и с помощью груши затянуть содержимое

[janez.livejournal.com]

Первая мысль - заморозить-отколоть, вторая - почитать комменты. Ну, все уже и сказали. :)

[victor-koldun.livejournal.com]

Где-то так:

(http://fotki.yandex.ru/users/viktor-koldun/view/468024/)
Посмотреть на Яндекс.Фотках (http://fotki.yandex.ru/users/viktor-koldun/view/468024/)

Сделать на иглу ограничитель-направляющую, для чего можно просто намотать из промазанной клеем бумаги пустотелую бобышку, чтобы убрать у пробирки лишние степени свободы, а прокол иглой и ее дальнейшее проникновение ограничить до минимального уровня.

[nicka-startcev.livejournal.com]

еще вариант - "пипетка для говен" - этой пипеткой отсасываем всё лишнее сверху, потом смело лезем чистой пипеткой.

и да. в любом случае мы или отсосем не весь осадок, или с осадком попадет немного жидкой фазы.
Которая из ошибок допустима?

еще вариант. центрифуговать, слить верхнеее, залить промывку, центрифуговать, смело набирать осадок с следами промывки.

[kirrr.livejournal.com]

А в крышечке септум, я так понимаю? Так переверните колбы кверху ногами, тогда осадок будет собираться на крышечке или около, а потом шприцом через септум отсосете.

[annaslavna.livejournal.com]

А собрать всю врехнюю фазу на салфетку обычную не пробовали?

[progenes.livejournal.com]

В процессе. Пробуем разное. Пока не с радиоактивностью, а с краской.

[annaslavna.livejournal.com]

Насколько плотный осоадок дают пластиды (я с животными клетками работаю)?
Если плотный то можно сделать так: берем шелковую толстую нить (для наложения кожных швов, небеленную, обработанную в МОТКЕ сухим теплом (120-135 градусов Цельсия 30 минут с момент подъема температуры) в стелянной банке ) и кладем ее офтальмологическим пинцетом до конца верхней фазы. Всерху укладываем 10-15 слоев просухожаренной туалетной бумаги (или салфеток - что есть) и резко переворачиваем дном вверх. Вехняя фаза оказывается на салфетке, а остаток на нитке. Все манипуляции можно сделать на лотке, чтобы радиоактивная кака не попола на вас. Признаюсь честно, так мы удаляли раствор с тимидином из таких пробирок ...

[progenes.livejournal.com]

Не очень плотный. Их нежно осаждают при малых оборотах. Но прием интересный.

[pashyrey.livejournal.com]

добавте первый шаг: вставить в пробирку трубку.
затем всё то что описано
после центрифугировання всё что нужно - через трубку взять то что на дне пробирки.

[molostoff.livejournal.com]

вот еще http://www.google.com/patents/US5785925

вообще, как-то стремно сепарацию радиоактивных материалов "выдумывать", набегут бородатые....

[Михаил Соколов (from livejournal.com)]

Достаточно просто это сделать толстой иглой с мандреном,
скорее катетером с мандреном, при жестко фиксированном эпендорфе.

предварительно возможно отслоить средний слой тяжелым гелем типа ПЭГ
или еще нейтральнее (ПЭГ может забирать воду) ....
С уважением, Михаил.