Выделяем ДНК!

[progenes]

Я думаю, это должно быть интересно, посмотреть под руки лабораторным трудящимся и понаблюдать за рутинным процессом выделения ДНК из растений. Итак, выделение ДНК в




Сначала ми идем в теплицу и выбираем себе жертву. Отрываем у нее несколько листочков и возвращаемся в лабораторию.




Затем одеваем резиновые перчатки. Во-первых, это красиво, во-вторых, таким образом мы защищаем свои руки от химреактивов.



Берем ступку, наливаем в нее жидкого азота, опускаем туда свежесорваный листочек и растираем по возможности в пыль и добавляем немного (приблизительно 500 микролитров) экстракционного раствора. Раствор для экстракции содержит поваренную соль и детергенты (такие, как в стиральном порошке), а белки выпадают в осадок.



Переносим суспензию в маленькую пробирку, которая на лабораторном сленге называется эппендорф. Теперь нам надо основательно осадить, все что выпало в осадок: белки и обломки клетки.



Для этого нам понадобится центрифуга, куда мы вставляем эппендорфы с растительным экстрактом ДНК. Закрываем и нажимаем кнопочку. Центрифуга раскручивается до 13000 оборотв в минуту и все, что не растворилось в экстракционном растворе, осаждается на дно эппендорфа.



А над осадком будет раствор ДНК, который мы осторожно отбираем пипеткой и выливаем в стаканчик со спиртом. ДНК в спирте выпадает в осадок в виде сопли (простите за сравнение, но из песни слова не выкинешь).



Ее вполне можно намотать на стекляную палочку и полюбоваться. Но это скорее для демонстрации изумленной публике. А потом эту соплю мы опускаем в чистый эппендорф и откручиваем на центрифуге еще раз. На этот раз осадок это как раз то, что нам нужно. То есть относительно чистая ДНК.



Мы отбираем пипеткой остатки спирта, подсушиваем осадок и растворяем в 50 микролитрах воды. Эппендорф подписываем и ставим в коробочку в холодильник на минус 80°C до следующего опыта.


Домашнее задание: Выделение ДНК из клубники в домашних условиях.

Контрольные вопросы:
Что это за сопля на палочке:
1. Кто-то неудачно чихнул?
2. Раствор зарос грибом?
3. ДНК!

Вопросы для размышления:
1. А где РНК?
2. А если я посмотрю это под микроскопом то увижу хромосомы как на картинке?
3. Ну и где тут гены?
4. А если выделить не из листочка, а из цветка, то это будет какая-то другая ДНК?
5. Для того, чтоб выделить ДНК из меня, мне что, пальчик отрубить и растереть?


Завтра будем измерять концентрацию и разглядывать ДНК в ультрафиолете.

Comments

[0lenka.livejournal.com]

Про отрубленный пальчик порвало два раза. Первый - когда я поняла, почему триллеры про злобных генетиков и их монстров столь популярны. Второй - когда до меня дошло, что делают во Львове с отходами борьбы за чистоту языка :)))

[progenes.livejournal.com]

Сейчас тебя порвет в третий раз. Я действительно не знаю, что там растирают нонче? Сначала я была уверена, что у людей, если они не трупы, ДНК выделяют из клеток крови. Но потом я подумала, что у эритроцитов с ДНК туго. Я разволновалась, но потом успокоила себя, что там есть другие клетки, которые наверняка с ДНК. Правда ж?

[ddodo.livejournal.com]

Там лейкоцитов хватает. Кровь берут, это проще всего.
Я когда анализ крови сдаю, беру с собой пару пробирок. "А теперь мне вот сюда нацедите, пожалуйста". Лицо лаборанта представь? Вот только ради этого уже можно. :)) Внутривенно колоть я сама не умею. А случалось по-быстрому из пальца кубик-два. Для особо любимых коллег, на отрицательнный контроль. :))

Мышам хвосты режут, кролям уши.

[progenes.livejournal.com]

Ты меня успокоила! Тогда скажи, что мазок изо рта для типирования так это того... для ПЦРа, достаточно, да? Они ж наверное даже скорее всего просто клетки лизируют и ПЦРят маркерными праймерами.

[ddodo.livejournal.com]

Достаточно. Не только изо рта. :))))

Ну да, чаще всего лизируют и на ДНК сорбент сажают. Потом промыть и снять с сорбента. И то все больше экспресс-методов, без промывки.

[ddodo.livejournal.com]

Кровь - это когда надо много и вдумчиво. Под сиквенс, скажем, для определения мутаций.

[0lenka.livejournal.com]

А я, честно говоря, тоже не сильно в курсе, но, если по логике - то соскоба эпителия должно хватать :) ваткой за щеку и до свидания. Если, конечно, в утреннем анамнезе не было орального секса. А то такие результаты будут...

[progenes.livejournal.com]

Там и до митохондриальной евы и рукой подать.