progenes | Лабораторные суеверия, мифы и факты про РНК.

Прошлый пост затронул любимую тему молекулярщиков - выделение РНК. Я тут собрала наши лабораторные мифы и суеверия об РНК.

Итак, 15 РНК фактов:

1. Перед тем, как приступить к выделению РНК, надо все реактивы и инструменты проавтоклавировать и охладить. Реактивы готовить на специальной воде, которая обработана ингибиторами ферментов (DEPC), которые разрушают РНК (РНКазы). Инструменты (ступки, пробирки, носики для пипеток) также обрабатываются этой водой с DEPC перед автоклавированием (стерилизацией). Поверхность стола обрабатывается ингибиторами РНКаз - DEPC. Если есть возможность, то носики-насадки на пипетки следует брать разовые, специально предварительно обработанные на заводе ингибиторами РНКаз. Материал растирать в жидком азоте, а последующие процедуры экстракции проводить на льду. Перед выделением РНК хорошо выспаться, сверить протокол с фазами луны и выгнать из лаборатории праздношатающихся. DEPC поставить на столе для отпугивания РНКаз.

2. Выделение РНК - едва ли не единственный экспериментальный процесс, где резиновые перчатки призваны не защитить руки экспериментатора от ядовитых реактивов, а скорее РНКу от рук экспериментатора (на руках есть РНКазы). На РНКу в процессе выделения не дышать (в зловонном дыхании есть РНКазы). И не смотреть (мало ли чего).

3. У каждого экспериментатора есть свой тайный протокол выделения РНК с прописями уникальных буферов. Протокол включает минимум 10 последовательных шагов экстракции разными реактивами, не считая очистки в хлориде лития и обработки ДНКазами. У меня таких протокола три.

4. Все-равно РНК обычно валится еще до того, как сделан последний шаг в выделении - растворение осадка. Шансы на успешное выделение РНК сильно падают, если записать протокол в лабораторный журнал до того, как РНКу окончательно выделить и померять на спектрофотометре.

5. Если придерживаться всех рекомендаций и делать все процедуры очень тщательно, то в одном из образцов обязательно окажется мелкая мушка. Это будет самый важный образец. Наличие мухи на результаты не повлияет.

6. Тем не менее существует копеечный набор реактивов для выделения РНК, который состоит из всего 3х растворов: буфер для экстракции, раствор для осаждения и буфер для разведения осадка РНКи. Все процедуры проводятся при комнатной температуре ~~на грязном столе~~ за один час.

7. Набор снят с производства в результате заговора империалистов. Состав реактивов не знает никто.

8. Опытным путем установлено, что РНК после выделения китом фирмы QUIAGEN показывает прекрасную очистку на фотометре, чудесное качество на контрольных форезах, но отвратительную афинность при гибридизации.

9. В то же время, грязная и некачественная РНК, выделенная тайным китом из трех реактивов, дает исключительный результат во всех дальнейших процедурах.

10. Существуют колонки для очистки и концентрации РНК, но ими категорически не рекомендуется пользоваться тем, у кого отсутствует чувство юмора, потому что у колонок отсутутвует опция остаточного объема и иногда вываливается мембрана. Есть и колонки с остаточным объемом и прочной мембраной, но они не подходят для стандартных пробирок от фирмы эппендорф, а пробирки, которые поставляются с колонками непригодны для автоклавирования, нестерильны и могут содержать РНКазы.

11. Я знаю человека, который выделяет РНК из пшеничной муки. Хорошую и качественную РНКу. Это лабораторный волшебник.

12. Я знаю человека, который выделяет РНК из отдельных клеток, причем количество РНК не фиксируется приборами. Тем не менее, он утверждает, что РНК в растворе присутствует. Это лабораторный шулер.

13. Я знаю лаборантку, которая выделяет всегда одинаковое количество хорошей РНКи из разных проб. При этом она не пользуется разовыми носиками для пипеток фабричной расфасовки. Это просто хорошая лаборантка.

14. Я знаю докторанта, который придерживается всех рекомендаций и ни разу не выделил хорошей РНКи. Причем я знаю много таких докторантов. Почти все докторанты такие. Они ходят со своими пробами к хорошей лаборантке.

15. Тем не менее, я люблю работать с РНК даже больше, чем с ДНК.